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本试剂盒是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

WST-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。

WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考下图)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。



WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。

组分	100次	500次	2500次	10000次
CCK-8溶液	1mL	5mL	25mL	100mL
说明书	1份

保存：4℃避光，有效期一年。

• 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
  
• 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。
  
• 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

• 通常细胞增殖实验每孔加入100μL 2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μL 5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养并给予0～10μL特定的药物刺激。
  
• 每孔加入10μL CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200μL，则需加入20μL CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
  
• 在细胞培养箱内继续孵育0.5～4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
  
• 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420～480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。
  
• 将不同数量的HeLa细胞按照每孔100μL培养液接种到96孔板中，培养至细胞贴壁充分后，每孔加入10μL的CCK-8溶液孵育2小时后测定A450的检测效果图参考图2。检测效果仅供参考，实测数据会因检测仪器等的不同而存在差异。
  
  图2.CCK-8试剂盒测定不同数量HeLa细胞的检测效果图。实测数据会因检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

• CCK-8溶液对细胞的毒性大小如何？
  CCK-8溶液对细胞的毒性非常低，通常观察不到细胞毒性。细胞在CCK-8法检测后仍然可以正常生长，并可以用于其它的细胞实验。但为了避免CCK-8溶液可能带来的对于后续检测的影响，除非该细胞极难获得，否则不推荐把CCK-8溶液孵育过的细胞用于其它实验。
  
• 如果吸光度值太低，可以采取什么办法？
  
  • 适当增加细胞数量。
    
  • 延长加入CCK-8溶液后的孵育时间。

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